几种重要花生病毒研究新进展
许泽永,陈坤荣,晏立英
(中国农业科学院油料作物研究所 油料作物遗传改良农业部重点实验室， 武汉 430062)
摘要：花生病毒病是影响花生生产的重要病害。近10年来，花生矮化病毒(PSV)、花生条纹病毒(PStV)和番茄斑萎病毒属(Tospovirus)病毒分子生物学研究进展，极大地丰富了对上述病毒基因组结构、遗传变异、进化的认识，以及病毒种、亚组和株系的科学划分。对PSV来说，提出了2个亚组的划分，而我国PSV株系血清学和RNA3全序列的分析，明确它们独自构成第3个新的亚组。对我国和东南亚国家PStV株系CP基因序列同源性的分析，说明在这些国家和地区PStV是单独进化的，形成不同症状类型的株系。Tospovirus属病毒分子生物学研究的深入使得该属病毒从番茄斑萎病毒(TSWV)1种增加到13种，其中侵染花生的病毒达5种，分布于不同的国家和地区。
关键词：花生病毒； 花生矮化病毒； 花生条纹病毒； 番茄斑萎病毒属病毒； 分子生物学
西瓜花叶病毒2号南瓜分离物的鉴定及其外壳蛋白基因序列分析
杨国慧1，2，张仲凯1*，崔崇士2（1云南省农业生物技术重点实验室， 昆明 650223； 2东北农业大学园艺学院， 哈尔滨 150030）
摘要：利用电镜和酶联免疫吸附测定法（ELISA）在黑龙江省采集的南瓜病样中检测到西瓜花叶病毒2号（WMV-2）。再利用免疫PCR（IC-PCR）和反转录PCR（RT-PCR）方法，扩增获得其外壳蛋白（CP）基因片段，并克隆到pGEM-T载体中。核苷酸序列测定表明，该分离物CP基因全长为852个核苷酸，编码由284个氨基酸组成的31.8 kDa蛋白。与国外已报道的WMV-2 CP基因相比，其核苷酸序列同源性为92.2%～94.0% ，由此推导的氨基酸序列同源性为94.5%～98.1%。与国内2个分离物相比，和山西分离物核苷酸和氨基酸的同源性都达到98.5%，和郑州分离物核苷酸和氨基酸的同源性分别为91.5%和95.0%。
关键词：南瓜; 西瓜花叶病毒2号; 鉴定; 外壳蛋白基因
柑桔溃疡病菌PCR快速检验检疫技术研究
王中康1，孙宪昀2，夏玉先1，周常勇3，殷幼平1* (1重庆大学基因工程研究中心， 生物力学与组织工程教育部重点实验室， 重庆 400 030；2西南农业大学植保学院， 重庆 400716； 3中国农业科学院柑桔研究所， 重 庆 400712)
摘要：柑桔溃疡病是严重影响全世界柑桔生产的重大检疫性病害，根据柑桔溃疡病菌(Xanthomon as axonopodispv. citri)新近公布的全基因组中独有的保守蛋白基因序列，设计筛选出一对种特异性引物(JYF5/JYR5)，能专一地扩增检出柑桔组织表面所带溃疡病菌的DNA靶带(413 bp)。而柑桔叶面附生的非致病性黄单胞菌、野油菜黄单胞菌近缘种以及健康柑桔样品都不能扩增；靶细菌DNA检测下限1.56 pg/μL，靶细菌悬浮液检测下限10 cfu/μL；在不同PCR仪及各种控温方式下都能稳定地扩增出特征性靶带。这一特异、准确的柑桔溃疡病菌PCR检验技术和研制的预包被固相化PCR检测试剂盒已开始用于我国非疫生产区建设中柑桔苗木、果实的病害检疫检验。
关键词：Xanthomonas axonopodis pv. citri； 柑桔溃疡病； PCR； 检疫
玉米叶片受新月弯孢菌侵染后的细胞病理学变化
黄丽丽1，王兰1，2，康振生1*，赵杰1，张管曲1(1西北农林科技大学植保学院， 陕西杨凌 712100； 2塔里木农垦大学植物科技学院， 新疆阿拉尔 843300)
摘要：本文利用透射电子显微镜技术与细胞化学技术研究了玉米叶片受弯孢菌侵染后的超 微结构和细胞壁的组成成份变化。透射电镜观察发现，病菌侵入后，菌丝先在寄主细胞间扩 展，随着寄主细胞病变、坏死，菌丝可进入寄主细胞形成胞内菌丝。随病菌侵入和在寄主体 内扩展，寄主细胞先后发生了一系列的超微结构变化，叶绿体、液泡等细胞器解体，出现质 壁分离现象，并最终解体、坏死、变形。细胞化学标记定位发现，受侵寄主细胞壁中纤维素 、木聚糖和果胶质的标记密度明显低于未接种的健康组织，表明细胞壁降解酶(如纤维素酶 、木聚糖酶和果胶酶)的产生与病菌侵染和致病过程密切相关。
关键词：玉米； 弯孢菌叶斑病； 超微结构； 细胞化学； 细胞壁降解酶
烟草低头黑病菌毒素对烟草丙二醛含量和某些防御酶的动态影响
房保海，张广民*，迟长凤，刘萍（山东农业大学植保学院植物病理系， 泰安 271018）
摘要：本文研究了烟草抗病品种(Burley21)和感病品种(NC82)在烟草低头黑病菌毒素诱导下，丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量及超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）、多酚氧化酶（PPO）活性的动态变化。结果表明，在毒素的诱导下，MDA含量的增减比率抗病品种Burley21低于感病品种NC82。不论Burley21还是NC82，SOD、POD和PPO活性皆在前期表现为上升后期下降，但抗病品种较感病品种下降速度慢，而且POD在后期还表现为高活性。表明抗病品种（Burley21）具有比感病品种（NC82）更强的防御能力和抗膜脂过氧化能力。
关键词：烟草低头黑病； 烟草低头黑病菌； 毒素； 丙二醛； 超氧化物歧化酶； 过氧化物酶； 多酚氧化酶
马铃薯Y病毒侵染对叶绿体超微结构、光合和荧光参数的影响
彭晏辉,雷娟利,黄黎锋，喻景权*（浙江大学农业与生物技术学院， 杭州 310029）
摘要：马铃薯Y病毒（PVY）侵染导致马铃薯叶片叶绿体个体变小，部分叶绿体的结构遭到破坏，淀粉粒的体积变小而粒数密度提高。随着病毒侵染，叶片中的叶绿素含量逐步减少，光合系统电子传递速率和净光合速率显著下降， 而光系统II的最大光化学效率则没有显著变化。PVY导致叶绿体结构破坏和碳同化酶活性下降，可能是造成光合作用下降的主要原因。
关键词：马铃薯Y病毒； 马铃薯； 叶绿体超微结构； 体视学； 光合作用； 叶绿素荧光
甘蔗花叶病毒在玉米种子中的分布及其与种子传毒的关系
李莉1，王锡锋1，郝宏京2，周广和1*（1中国农业科学院植物保护研究所， 植物病虫害生物学国家重点实验室， 北京 100094；2中国农业科学院原子能研究与利用研究所， 北京 100094）
摘要：采用免疫学、电镜观察、RT-PCR、组织培养及生物学测定等方法，针对引起玉米矮花叶病的甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus, SCMV)在高感自交系Mo17的乳熟期、蜡熟期、成熟期和室温贮存的成熟干种子上的分布部位及其各部位病毒的侵染性进行了研究。结果表明：病毒存在于种皮、胚乳的糊粉层和胚内，糊粉层和胚内的病毒具有侵染活力，胚内的可侵染性病毒可以通过发芽传递给下一代幼苗，完成病毒的种子传播过程。在种皮内没有检测到具有侵染活力的病毒，在胚乳的淀粉层内未检测到病毒。在种子成熟过程中，种子内的病毒不断得到积累，随着种子的脱水、干燥又被部分钝化，使得种子传毒率降低。
关键词：甘蔗花叶病毒； 胚带毒； 种子传毒； 侵染活力
水稻条斑病细菌类Harpin蛋白的纯化与特性研究
陆徐忠，邵敏，闻伟刚，王金生*（南京农业大学植保系， 农业部病虫监测与治理重点开放实验室， 南京 210095）
摘要：用硫酸铵沉淀、制备等电聚焦电泳、阴离子交换层析等方法从水稻条斑病细菌(Xanthomonas oryzae pv. oryzicola， Xooc)RS105菌株突变体M51菌体破碎液中纯化出可激发烟草产生过敏性反应(hypersensitive response， HR)的蛋白类物质，分子量约为25.5 kDa。该物质与梨火疫病菌(Erwinia amylovora))的HarpinEa和水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv. oryzae， Xoo)的HarpinXoo具有相似的生物活性和理化特性：可激发烟草产生典型的HR反应；对热稳定，对蛋白酶K敏感；RNA转录抑制剂放线菌素D、蛋白质合成抑制剂环己酰亚铵和钙离子通道阻断剂氯化镧能够抑制该物质激发烟草产生HR；该物质具有诱导烟草抗TMV的功能。据此，将该物质命名为类Harpin蛋白（Harpin-like protein, HLPXooc）。
关键词：水稻条斑病细菌； 过敏性反应； 蛋白质类激发子； Harpin诱导抗病性
南方根结线虫对生姜生长及内源激素的影响
郭衍银，王秀峰，徐坤*，朱艳红，郑永强 （山东农业大学园艺学院， 泰安 271018）
摘要：试验结果表明，南方根结线虫侵染生姜后，首先损伤根系，进而显著降低生姜植株的
株高、地上鲜重、根系鲜重和根茎重，减产47.96%。南方根结线虫侵染可使生姜叶片中赤霉素（GA）、吲哚乙酸（IAA）、玉米素核苷（ZR）含量显著降低，感病生姜的脱落酸（ABA）
则表现为前期降低，后期增加的趋势，并促使叶片中GA/ABA的迅速下降，严重影响了生姜的生长，使感病植株矮小、叶片黄化，提前衰老。感病生姜根茎GA、IAA、ZR、ABA的变化规律与叶片相似，但9月份ZR、IAA含量的迅速上升，与根结线虫建立侵染据点、形成巨型细胞，从而造成根茎的局部疣裂有关。南方根结线虫侵染可引起病株根系GA/ABA升高以及GA含量在生长后期上升，促进营养物质向根部运输，从而造成根系的补偿性生长；但IAA和ZR含量的下降不利于根结线虫建立侵染据点，不能在根系中形成过多的根结。
关键词：生姜； 南方根结线虫； 内源激素； 生长
稻瘟病菌在水稻CO39近等基因系上的生命表和繁殖表
张卫民1，王振中1*，蔡银杰2，贾显禄1（1华南农业大学资源环境学院， 广州 510642； 2南通农业职业技术学院， 江苏 南通 226007）
摘要：本文选用以CO39为背景的水稻近等基因系与广东省稻瘟病菌3个优势生理小种（ZC13
、ZB1和ZB5）构成12个亲和性和非亲和性互作组合，组建各组合稻瘟病菌的生命表和繁
殖表，分析在亲和性互作中稻瘟病菌的生存和繁殖状况对寄主发病的影响，并探讨在非亲和性互作中抗性基因在抵御病菌侵染过程中的作用。结果表明，在亲和性和非亲和性互作中，稻瘟病菌生长繁殖各阶段均参与了感抗反应并发挥了一定的作用：在CO39近等基因系上，同一小种的孢子萌发率或菌丝形成率无明显差别，而小种间则表现一定差异；病菌的定殖和繁殖是亲和与非亲和互作的关键阶段，定殖率、病斑形成率低，则寄主表现抗病，反之则表现感病。在繁殖表众多表示种群增长的参数中，世代平均产孢量F'、净增殖率R0、最大相对增长率rmax和种群趋势指数I等4个指标适合于反映稻瘟病菌繁殖状况与感抗病反应的关系。
关键词：稻瘟病菌； 水稻近等基因系； 生命表； 繁殖表
草酸青霉菌果胶酶诱导黄瓜抗黑星病研究
彭霞薇，张洪勋*，白志辉（中国科学院生态环境研究中心， 北京 100085）
摘要：本文就草酸青霉菌（Penicillium oxalicum）的固态发酵提取产物——果胶酶粗酶液诱导黄瓜对黑星病（Cladosporium cucumerinum）的抗性进行了研究。以果胶酶粗酶液喷雾处理4个感黑星病黄瓜品种的黄化苗，48 h后挑战接种黑星病菌孢子悬液，其中“中农5号”黄瓜品种表现的诱导抗病效果最好，诱抗效果达62.51％。不同浓度果胶酶诱导处理黄瓜，发现果胶酶浓度在20 U/mL时，可导致黄瓜发病略高于对照；在40～200 U/mL浓度范围内，诱导效果较为明显。通过研究果胶酶诱导抗病的时效性，表明诱导处理前接种病菌或诱导处理后0、6 h接种的各处理病情指数与对照间没有差别，而诱导处理12～72 h后接种病菌的，果胶酶的诱导抗病效果均很明显，诱抗效果达29.64％～60.02％。实验还表明，随着挑战接种压力的增大，果胶酶的诱导抗病效果降低。果胶酶不能抑制黑星病菌孢子萌发，相反可以促进孢子萌发和芽管生长。
关键词：草酸青霉； 果胶酶； 黑星病菌； 黄瓜； 诱导抗病性
地高辛标记的cDNA探针检测烟草花叶病毒、黄瓜花叶病毒及马铃薯Y病毒
杜国英，王锡锋*，周广和（中国农业科学院植物保护研究所， 植物病虫害生物学国家重点实验室， 北京 100094）
摘要：根据已发表的烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus, TMV）、黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus， CMV）和马铃薯Y病毒（Potato virus Y， PVY）的外壳蛋白基因序列，设计特异引物，分别以提取的TMV、CMV和PVY侵染的病叶总RNA为模板，反转录PCR进行体外扩增，分别得到长度为0.44、0.77、0.80 kb的目的片段，并克隆到pGEM-T easy质粒载体上，以构建的重组质粒为模板，用PCR方法合成了相应的地高辛标记的双链DNA探针。以合成的探针通过斑点杂交技术检测烟草病叶总RNA和烟草病叶汁液。TMV、CMV和PVY的3种地高辛探针检测各自感染的烟草病叶总RNA的稀释低限分别为1∶1 000、1∶10 000、1∶320，检测各自侵染烟草病汁液的最大稀释倍数分别为1∶100、1∶100、1∶10，而每种探针与健康烟草和其它2种病毒的反应均为阴性。
关键词：TMV； CMV； PVY； 地高辛标记探针； 斑点杂交
生防菌株2P24与CPF-10的鉴定及其生防相关性状的初步分析
魏海雷，王烨，张力群*，唐文华（中国农业大学植物病理系， 北京 100094）
摘要：从山东省小麦根围土壤中分离到具有生防活性的细菌菌株2P24、CPF-10。通过对其16S rDNA序列同源性分析及生理生化测定鉴定为荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens），其中菌株2P24为生物型I，CPF-10为生物型V。对这2株细菌的生防相关性状分析表明，二者均可产生多种抗菌物质，如2,4-二乙酰基间苯三酚（2,4-DAPG）、氢氰酸（HCN）、嗜铁素、蛋白酶等。平板对峙测定表明2株细菌对番茄青枯菌（Rastonia solanacearum）、棉花立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）、棉花枯萎菌（Fusarium oxysporum）具有明显的拮抗作用。温室生测表明2P24对番茄青枯病的防效达63.0％，CPF-10达62.4％，且持续稳定。
关键词：生物防治； 16S rDNA； Pseudomonas fluorescens； 生防性状； 番茄青枯病
长白山沿脉参类锈腐病菌比较生物学研究
严雪瑞，傅俊范*（沈阳农业大学植物保护学院， 辽宁 沈阳 110161）
湖北省西北部山区小麦条锈菌越夏研究简报
铁皮石斛黑斑病病原菌的鉴定和侵染过程的细胞学研究
云南发现石榴枯萎病
黄琼1，卢文洁1，范金祥2，陆进3，
朱文棣3，高向云4，陈海如1，朱有勇1*
（1云南农业大学植物病理重点实验室， 昆明 650201； 2红河州植保植检站， 蒙自 654300；3蒙自县植保植检站， 蒙自 654300； 4蒙自县科技局， 蒙自 654300）
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